អ្វីដែលត្រូវធ្វើ និងកុំសម្រាប់ការធ្វើតេស្តម៉ូលេគុល

អ្នកបច្ចេកទេសមន្ទីរពិសោធន៍កាន់ឧបករណ៍ប្រមូលសំណាក មេរោគកូវីដ-១៩ ឧបករណ៍ប្រមូលសំណាក DNA ច្រមុះ និងមាត់សម្រាប់ដំណើរការធ្វើតេស្តមន្ទីរពិសោធន៍ប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់ PCR និងការដឹកជញ្ជូន

វិធីសាស្រ្តរាវរកម៉ូលេគុលមានសមត្ថភាពក្នុងការផលិតបរិមាណដ៏ធំនៃអាស៊ីត nucleic តាមរយៈការពង្រីកបរិមាណដានដែលបានរកឃើញនៅក្នុងគំរូ។ខណៈពេលដែលវាមានប្រយោជន៍សម្រាប់ការបើកការរកឃើញរសើប វាក៏ណែនាំពីលទ្ធភាពនៃការចម្លងរោគតាមរយៈការរីករាលដាលនៃ amplification aerosols នៅក្នុងបរិយាកាសមន្ទីរពិសោធន៍។នៅពេលធ្វើការពិសោធន៍ វិធានការអាចត្រូវបានធ្វើឡើង ដើម្បីជៀសវាងការចម្លងរោគនៃសារធាតុប្រតិកម្ម ឧបករណ៍មន្ទីរពិសោធន៍ និងកន្លែងអង្គុយ ព្រោះការចម្លងរោគបែបនេះអាចបង្កើតលទ្ធផលមិនពិត (ឬអវិជ្ជមាន)។

ដើម្បីជួយកាត់បន្ថយលទ្ធភាពនៃការចម្លងរោគ ការអនុវត្តមន្ទីរពិសោធន៍ល្អគួរតែត្រូវបានអនុវត្តគ្រប់ពេលវេលា។ជាពិសេស ត្រូវមានការប្រុងប្រយ័ត្នចំពោះចំណុចខាងក្រោម៖

1. ការគ្រប់គ្រងសារធាតុប្រតិកម្ម
2. ការរៀបចំកន្លែងធ្វើការ និងឧបករណ៍
3. ការណែនាំអំពីការប្រើប្រាស់ និងការសម្អាតសម្រាប់ចន្លោះម៉ូលេគុលដែលបានកំណត់
4. ដំបូន្មានជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលទូទៅ
5. ការត្រួតពិនិត្យផ្ទៃក្នុង
6. គន្ថនិទ្ទេស

1. ការគ្រប់គ្រងសារធាតុប្រតិកម្ម

សង្ខេបបំពង់ centrifuge reagent មុនពេលបើក ដើម្បីជៀសវាងការបង្កើត aerosols ។Aliquot reagents ដើម្បីជៀសវាងការបង្កកច្រើន និងការចម្លងរោគនៃភាគហ៊ុនមេ។ដាក់ស្លាក និងកាលបរិច្ឆេទឱ្យច្បាស់លាស់នូវបំពង់ប្រតិកម្ម និងប្រតិកម្មទាំងអស់ ហើយរក្សាកំណត់ហេតុនៃចំនួន reagent និងលេខបាច់ដែលបានប្រើនៅក្នុងការពិសោធន៍ទាំងអស់។Pipette សារធាតុប្រតិកម្ម និងសំណាកទាំងអស់ដោយប្រើគន្លឹះតម្រង។មុនពេលទិញ គួរតែបញ្ជាក់ជាមួយក្រុមហ៊ុនផលិតថា គន្លឹះតម្រងត្រូវនឹងម៉ាក pipette ដែលត្រូវប្រើ។

2. ការរៀបចំកន្លែងធ្វើការ និងឧបករណ៍

កន្លែងធ្វើការគួរតែត្រូវបានរៀបចំដើម្បីធានាថាលំហូរការងារកើតឡើងក្នុងទិសដៅមួយ ពីតំបន់ស្អាត (មុន PCR) ដល់តំបន់កខ្វក់ (ក្រោយ PCR)។ការប្រុងប្រយ័ត្នទូទៅខាងក្រោមនឹងជួយកាត់បន្ថយឱកាសនៃការចម្លងរោគ។មានបន្ទប់ដែលបានកំណត់ដាច់ដោយឡែក ឬនៅផ្នែកដាច់ដោយឡែកពីគ្នាយ៉ាងតិចបំផុតសម្រាប់៖ ការរៀបចំម៉ាស្ទ័រមីក ការទាញយកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក និងការបន្ថែមគំរូ DNA ការពង្រីក និងការគ្រប់គ្រងផលិតផលពង្រីក និងការវិភាគផលិតផល ឧ. អេឡិចត្រុច ជែល។

នៅក្នុងការកំណត់មួយចំនួន ការមានបន្ទប់ដាច់ដោយឡែកចំនួន 4 គឺពិបាកណាស់។ជម្រើសដែលអាចធ្វើបាន ប៉ុន្តែមិនសូវចង់បានគឺត្រូវរៀបចំល្បាយមេនៅក្នុងកន្លែងផ្ទុក ឧ. គណៈរដ្ឋមន្ត្រីលំហូរ laminar ។នៅក្នុងករណីនៃការពង្រីក PCR ដែលត្រូវបានភ្ជាប់ ការរៀបចំល្បាយមេសម្រាប់ប្រតិកម្មជុំទីពីរគួរតែត្រូវបានរៀបចំនៅក្នុងតំបន់ 'ស្អាត' សម្រាប់ការរៀបចំ mastermix ប៉ុន្តែការបញ្ចូលជាមួយផលិតផល PCR បឋមគួរតែត្រូវបានធ្វើនៅក្នុងបន្ទប់ពង្រីក ហើយប្រសិនបើអាចធ្វើទៅបាន។ នៅក្នុងតំបន់ផ្ទុកជាក់លាក់មួយ (ឧទាហរណ៍ គណៈរដ្ឋមន្ត្រីលំហូរ laminar) ។

បន្ទប់/តំបន់នីមួយៗ ត្រូវការសំណុំដាច់ដោយឡែកនៃបំពង់ដែលមានស្លាកយ៉ាងច្បាស់ គន្លឹះតម្រង ប្រដាប់ដាក់បំពង់ បំពង់ខ្យល់ ឧបករណ៏កណ្តាល (ប្រសិនបើពាក់ព័ន្ធ) ប៊ិច ភ្នាក់ងារមន្ទីរពិសោធន៍ទូទៅ អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងប្រអប់ស្រោមដៃ ដែលនឹងនៅតែមាននៅស្ថានីយការងាររៀងៗខ្លួន។ដៃត្រូវតែលាងសម្អាត ហើយស្រោមដៃ និងអាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍បានផ្លាស់ប្តូរនៅពេលផ្លាស់ទីរវាងតំបន់ដែលបានកំណត់។សារធាតុ និងឧបករណ៍មិនគួរផ្លាស់ទីពីកន្លែងកខ្វក់ទៅកន្លែងស្អាតទេ។ប្រសិនបើករណីធ្ងន់ធ្ងរកើតឡើង ដែលសារធាតុប្រតិកម្ម ឬគ្រឿងបរិក្ខារត្រូវផ្លាស់ទីថយក្រោយ នោះដំបូងត្រូវតែត្រូវបានសម្អាតដោយសារធាតុសូដ្យូមអ៊ីប៉ូក្លរីត 10% ជាមុនសិន បន្ទាប់មកជូតដោយទឹកមិនស្អាត។

ចំណាំ

ដំណោះស្រាយ 10% សូដ្យូម hypochlorite ត្រូវតែត្រូវបានបង្កើតឡើងជារៀងរាល់ថ្ងៃ។នៅពេលប្រើសម្រាប់ការកំចាត់មេរោគ ពេលវេលាទំនាក់ទំនងអប្បបរមា 10 នាទីគួរតែត្រូវបានប្រកាន់ខ្ជាប់។
ម៉្យាងទៀត ផលិតផលដែលអាចរកទិញបានដែលមានសុពលភាពជាសារធាតុកខ្វក់លើផ្ទៃដែលបំផ្លាញ DNA អាចត្រូវបានប្រើ ប្រសិនបើការណែនាំសុវត្ថិភាពក្នុងតំបន់មិនអនុញ្ញាតឱ្យប្រើប្រាស់សូដ្យូមអ៊ីប៉ូក្លរីត ឬប្រសិនបើសូដ្យូមអ៊ីប៉ូក្លរីតមិនស័ក្តិសមសម្រាប់ការសម្អាតផ្នែកលោហធាតុរបស់ឧបករណ៍។

តាមឧត្ដមគតិ បុគ្គលិកគួរតែគោរពតាមក្រមសីលធម៌នៃលំហូរការងារគ្មានទិសដៅ ហើយមិនត្រូវចេញពីកន្លែងកខ្វក់ (ក្រោយ PCR) ត្រឡប់ទៅកន្លែងស្អាត (មុន PCR) នៅថ្ងៃដដែលនោះទេ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ វាអាចមានពេលខ្លះដែលវាជៀសមិនរួច។នៅពេលឱកាសបែបនេះកើតឡើង បុគ្គលិកត្រូវយកចិត្តទុកដាក់លាងដៃឱ្យបានហ្មត់ចត់ ផ្លាស់ប្តូរស្រោមដៃ ប្រើអាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ដែលបានកំណត់ ហើយមិនត្រូវណែនាំឧបករណ៍ដែលពួកគេនឹងចង់យកចេញពីបន្ទប់ទៀតទេ ដូចជាសៀវភៅមន្ទីរពិសោធន៍ជាដើម។វិធានការត្រួតពិនិត្យបែបនេះគួរតែត្រូវបានសង្កត់ធ្ងន់នៅក្នុងការបណ្តុះបណ្តាលបុគ្គលិកលើវិធីសាស្ត្រម៉ូលេគុល។

បន្ទាប់ពីប្រើរួច កន្លែងអង្គុយគួរត្រូវបានសម្អាតជាមួយនឹង 10% sodium hypochlorite (តាមពីក្រោយដោយទឹកក្រៀវដើម្បីយកសារធាតុ bleach ដែលនៅសល់) អេតាណុល 70% ឬសារធាតុប្រឆាំងមេរោគ DNA ដែលអាចរកទិញបាន។តាមឧត្ដមគតិ ចង្កៀងអ៊ុលត្រាវីយូឡេ (UV) គួរតែត្រូវបានបំពាក់ ដើម្បីបើកការចម្លងមេរោគដោយការ irradiation ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការប្រើប្រាស់អំពូល UV គួរតែត្រូវបានដាក់កម្រិតទៅលើកន្លែងធ្វើការដែលបិទជិត ដូចជា ទូសុវត្ថិភាព ដើម្បីកំណត់ការប៉ះពាល់នឹងកាំរស្មី UV របស់បុគ្គលិកមន្ទីរពិសោធន៍។សូមគោរពតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិតសម្រាប់ការថែទាំអំពូល UV ខ្យល់ចេញចូល និងការសម្អាត ដើម្បីធានាថាចង្កៀងនៅតែមានប្រសិទ្ធភាព។

ប្រសិនបើប្រើអេតាណុល 70% ជំនួសឱ្យសូដ្យូម hypochlorite ការ irradiation ជាមួយនឹងពន្លឺ UV នឹងត្រូវការជាចាំបាច់ដើម្បីបញ្ចប់ការចម្លងរោគ។
កុំសម្អាត vortex និង centrifuge ជាមួយ sodium hypochlorite;ជំនួសមកវិញ ជូតជាមួយអេតាណុល 70% ហើយប៉ះពាល់នឹងពន្លឺកាំរស្មី UV ឬប្រើសារធាតុប្រឆាំងមេរោគដែលបំផ្លាញ DNA ពាណិជ្ជកម្ម។សម្រាប់ការកំពប់ សូមពិនិត្យជាមួយក្រុមហ៊ុនផលិត ដើម្បីទទួលបានការណែនាំអំពីការសម្អាតបន្ថែម។ប្រសិនបើការណែនាំរបស់អ្នកផលិតអនុញ្ញាតនោះ pipettes គួរតែត្រូវបានក្រៀវជាប្រចាំដោយ autoclave ។ប្រសិនបើ pipettes មិនអាចត្រូវបាន autoclaved វាគួរតែគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីសម្អាតពួកវាជាមួយនឹង 10% sodium hypochlorite (តាមពីក្រោយដោយលុបលាងយ៉ាងហ្មត់ចត់ជាមួយទឹកមាប់មគ) ឬជាមួយ decontaminant បំផ្លាញ DNA ពាណិជ្ជកម្មអមដោយការប៉ះពាល់នឹងកាំរស្មី UV ។

ការលាងសម្អាតដោយប្រើសូដ្យូមអ៊ីប៉ូក្លរីតដែលមានភាគរយខ្ពស់អាចបំផ្លាញផ្លាស្ទិច និងលោហធាតុជាយថាហេតុ ប្រសិនបើធ្វើជាប្រចាំ។ពិនិត្យការណែនាំពីក្រុមហ៊ុនផលិតជាមុនសិន។ឧបករណ៍ទាំងអស់ត្រូវធ្វើការក្រិតតាមខ្នាតទៀងទាត់តាមកាលវិភាគដែលបានណែនាំដោយក្រុមហ៊ុនផលិត។អ្នកដែលត្រូវបានចាត់តាំងគួរតែទទួលខុសត្រូវក្នុងការធានាថាកាលវិភាគនៃការក្រិតតាមខ្នាតត្រូវបានប្រកាន់ខ្ជាប់ កំណត់ហេតុលម្អិតត្រូវបានរក្សាទុក ហើយស្លាកសេវាកម្មត្រូវបានបង្ហាញយ៉ាងច្បាស់នៅលើឧបករណ៍។

3. ការណែនាំអំពីការប្រើប្រាស់ និងការសម្អាតសម្រាប់ចន្លោះម៉ូលេគុលដែលបានកំណត់

Pre-PCR: Reagent aliquoting / mastermix preparation: នេះគួរតែស្អាតបំផុតនៃចន្លោះទាំងអស់ដែលប្រើសម្រាប់ការរៀបចំការពិសោធន៍ម៉ូលេគុល ហើយតាមឧត្ដមគតិគួរតែជាគណៈរដ្ឋមន្ត្រីលំហូរ laminar ដែលបានកំណត់ដែលបំពាក់ដោយអំពូល UV ។គំរូ អាស៊ីត nucleic ចម្រាញ់ និងផលិតផល PCR ដែលត្រូវបានពង្រីក មិនត្រូវដោះស្រាយនៅក្នុងតំបន់នេះទេ។ភ្នាក់ងារពង្រីកគួរតែរក្សាទុកក្នុងទូរទឹកកក (ឬទូទឹកកក តាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត) ក្នុងចន្លោះដែលបានកំណត់ដូចគ្នា តាមឧត្ដមគតិនៅជាប់នឹងធុងលំហូរ laminar ឬផ្ទៃមុន PCR ។ស្រោមដៃគួរតែត្រូវបានផ្លាស់ប្តូររាល់ពេលដែលចូលទៅក្នុងតំបន់មុន PCR ឬគណៈរដ្ឋមន្ត្រីលំហូរ laminar ។

ផ្ទៃមុន PCR ឬ laminar flow Cabinar គួរតែត្រូវបានសម្អាតមុន និងក្រោយពេលប្រើប្រាស់ដូចខាងក្រោម៖ ជូតធាតុទាំងអស់នៅក្នុងទូ ឧ. បំពង់ ប្រអប់ជំនួយ vortex, centrifuge, tube racks, pens, etc. ជាមួយនឹង 70% ethanol ឬ a សារធាតុប្រឆាំងមេរោគដែលបំផ្លាញ DNA ពាណិជ្ជកម្ម និងអនុញ្ញាតឱ្យស្ងួត។ក្នុងករណីកន្លែងធ្វើការបិទជិត ឧ. កាប៊ីនលំហូរ laminar, បញ្ចោញក្រណាត់ទៅពន្លឺ UV រយៈពេល 30 នាទី។

ចំណាំ

កុំបញ្ចេញសារធាតុប្រតិកម្មទៅនឹងពន្លឺ UV;គ្រាន់​តែ​ផ្លាស់ទី​វា​ទៅ​ក្នុង​ទូ​នៅ​ពេល​វា​ស្អាត។ប្រសិនបើអនុវត្តការចម្លងបញ្ច្រាស PCR វាអាចមានប្រយោជន៍ផងដែរក្នុងការលុបផ្ទៃ និងឧបករណ៍ជាមួយនឹងដំណោះស្រាយដែលបំបែក RNases នៅលើទំនាក់ទំនង។នេះអាចជួយជៀសវាងលទ្ធផលមិនពិត - អវិជ្ជមានពីការបំផ្លាញអង់ស៊ីមនៃ RNA ។បន្ទាប់ពីការបន្សាបជាតិពុល និងមុនពេលរៀបចំម៉ាស៊ីនលាយ ស្រោមដៃគួរតែត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរម្តងទៀត ហើយបន្ទាប់មកគណៈរដ្ឋមន្ត្រីរួចរាល់ក្នុងការប្រើប្រាស់។

Pre-PCR: ការទាញយកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក/ការបន្ថែមគំរូ៖

អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកត្រូវតែស្រង់ចេញ និងគ្រប់គ្រងក្នុងតំបន់ដែលបានកំណត់ទីពីរ ដោយប្រើបំពង់ដាច់ដោយឡែក គន្លឹះតម្រង ប្រដាប់ដាក់បំពង់ ស្រោមដៃស្រស់ អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងឧបករណ៍ផ្សេងទៀត។ តំបន់នេះក៏សម្រាប់បន្ថែមគំរូ ការគ្រប់គ្រង និងបន្ទាត់និន្នាការទៅ បំពង់ mastermix ឬចាន។ដើម្បីជៀសវាងការចម្លងរោគនៃសំណាកអាស៊ីត nucleic ដែលបានស្រង់ចេញដែលកំពុងត្រូវបានវិភាគ វាត្រូវបានណែនាំឱ្យផ្លាស់ប្តូរស្រោមដៃមុននឹងគ្រប់គ្រងការត្រួតពិនិត្យ ឬស្តង់ដារវិជ្ជមាន និងប្រើបំពង់ដាច់ដោយឡែក។សារធាតុ PCR និងផលិតផលពង្រីក មិនត្រូវដាក់បំពង់នៅក្នុងតំបន់នេះទេ។គំរូគួរត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងទូរទឹកកក ឬទូរទឹកកកដែលបានកំណត់នៅក្នុងតំបន់ដូចគ្នា។កន្លែងធ្វើការគំរូគួរតែត្រូវបានសម្អាតតាមរបៀបដូចគ្នាទៅនឹងទំហំ mastermix ។

Post-PCR: ការពង្រីក និងការគ្រប់គ្រងផលិតផលពង្រីក

ចន្លោះដែលបានកំណត់នេះគឺសម្រាប់ដំណើរការក្រោយការពង្រីក ហើយគួរតែដាច់ដោយឡែកពីតំបន់មុន PCR ។ជាធម្មតាវាផ្ទុកនូវម៉ាស៊ីនកម្តៅ និងវេទិកាតាមពេលវេលាជាក់ស្តែង ហើយតាមឧត្ដមគតិគួរតែមានគណៈរដ្ឋមន្ត្រីលំហូរ laminar សម្រាប់បន្ថែមផលិតផល PCR ជុំទី 1 ទៅនឹងប្រតិកម្មជុំទី 2 ប្រសិនបើ PCR ត្រូវបានដាក់ឱ្យដំណើរការ។សារធាតុ PCR និងអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកដែលបានស្រង់ចេញមិនត្រូវដោះស្រាយនៅក្នុងតំបន់នេះទេ ព្រោះហានិភ័យនៃការចម្លងរោគមានកម្រិតខ្ពស់។តំបន់នេះគួរតែមានស្រោមដៃ អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ដាច់ដោយឡែក ចាន និងបំពង់ បំពង់ទុយោ គន្លឹះតម្រង ធុងសំរាម និងឧបករណ៍ផ្សេងទៀត។បំពង់ត្រូវតែត្រូវបានផ្ចិតមុនពេលបើក។កន្លែងធ្វើការគំរូគួរតែត្រូវបានសម្អាតតាមរបៀបដូចគ្នាទៅនឹងទំហំ mastermix ។

ក្រោយ PCR: ការវិភាគផលិតផល

បន្ទប់នេះគឺសម្រាប់ឧបករណ៍រាវរកផលិតផល ឧ. រថក្រោះ gel electrophoresis, កញ្ចប់ថាមពល, ឧបករណ៍បំលែងកាំរស្មី UV និងប្រព័ន្ធឯកសារជែល។តំបន់នេះគួរតែមានស្រោមដៃ អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ដាច់ដោយឡែក ចាន និងបំពង់ បំពង់បង្ហូរ គន្លឹះតម្រង ធុងសំរាម និងឧបករណ៍ផ្សេងទៀត។មិនមានសារធាតុប្រតិកម្មផ្សេងទៀតអាចត្រូវបាននាំយកមកក្នុងតំបន់នេះទេ ដោយមិនរាប់បញ្ចូលសារធាតុជ្រលក់ពណ៌ សញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុល និងជែល agarose និងសមាសធាតុសតិបណ្ដោះអាសន្ន។កន្លែងធ្វើការគំរូគួរតែត្រូវបានសម្អាតតាមរបៀបដូចគ្នាទៅនឹងទំហំ mastermix ។

ចំណាំសំខាន់

តាមឧត្ដមគតិ បន្ទប់មុន PCR មិនគួរត្រូវបានបញ្ចូលក្នុងថ្ងៃតែមួយទេ ប្រសិនបើការងារត្រូវបានអនុវត្តរួចហើយនៅក្នុងបន្ទប់ក្រោយ PCR ។ប្រសិនបើនេះមិនអាចជៀសបានទាំងស្រុងទេ សូមប្រាកដថាដៃត្រូវលាងសម្អាតឱ្យបានហ្មត់ចត់ជាមុនសិន ហើយអាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ជាក់លាក់ត្រូវបានពាក់នៅក្នុងបន្ទប់។សៀវភៅមន្ទីរពិសោធន៍ និងឯកសារមិនត្រូវយកចូលក្នុងបន្ទប់មុន PCR ទេ ប្រសិនបើពួកវាត្រូវបានប្រើនៅក្នុងបន្ទប់ក្រោយ PCR ។បើចាំបាច់ យកការបោះពុម្ពស្ទួននៃពិធីការ/លេខសម្គាល់គំរូ។ល។

4. ដំបូន្មានជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលទូទៅ

ប្រើស្រោមដៃដែលគ្មានម្សៅ ដើម្បីជៀសវាងការរារាំងការធ្វើតេស្ត។បច្ចេកទេសបំពង់ត្រឹមត្រូវ គឺជាកត្តាសំខាន់បំផុតក្នុងការកាត់បន្ថយការចម្លងរោគ។ការដាក់បំពង់មិនត្រឹមត្រូវអាចបណ្តាលឱ្យមានការប្រឡាក់នៅពេលចែកចាយសារធាតុរាវ និងការបង្កើត aerosols ។ការអនុវត្តល្អសម្រាប់ការដាក់បំពង់ត្រឹមត្រូវអាចរកបាននៅតំណខាងក្រោម៖ Gilson guide to pipetting, Anachem pipetting technique videos, centrifuge tubes មុនពេលបើក ហើយបើកវាដោយប្រុងប្រយ័ត្នដើម្បីជៀសវាងការបែកទឹក។បិទបំពង់ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប្រើ ដើម្បីជៀសវាងការលេចចេញនូវសារធាតុកខ្វក់។

នៅពេលអនុវត្តប្រតិកម្មច្រើន សូមរៀបចំម៉ាស្ទ័រមួយ ដែលមានផ្ទុកសារធាតុប្រតិកម្មទូទៅ (ឧទាហរណ៍ ទឹក dNTPs សតិបណ្ដោះអាសន្ន សារធាតុ primers និងអង់ស៊ីម) ដើម្បីកាត់បន្ថយចំនួននៃការផ្ទេរសារធាតុឡើងវិញ និងកាត់បន្ថយការគំរាមកំហែងនៃការចម្លងរោគ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យរៀបចំ mastermix នៅលើទឹកកកឬប្លុកត្រជាក់។ការប្រើប្រាស់អង់ស៊ីម Hot Start អាចជួយកាត់បន្ថយការផលិតផលិតផលមិនជាក់លាក់។ការពារសារធាតុប្រតិកម្មដែលមានប្រដាប់ស្ទង់ fluorescent ពីពន្លឺ ដើម្បីជៀសវាងការរិចរិល។

5. ការត្រួតពិនិត្យផ្ទៃក្នុង

រួមបញ្ចូលការត្រួតពិនិត្យលក្ខណៈវិជ្ជមាន និងអវិជ្ជមានដែលត្រូវបានបញ្ជាក់ រួមជាមួយនឹងការគ្រប់គ្រងគ្មានគំរូនៅក្នុងប្រតិកម្មទាំងអស់ និងបន្ទាត់និន្នាការពហុចំណុចសម្រាប់ប្រតិកម្មបរិមាណ។ការត្រួតពិនិត្យជាវិជ្ជមានមិនគួរខ្លាំងដែលវាបង្កហានិភ័យនៃការចម្លងរោគនោះទេ។រួមបញ្ចូលការត្រួតពិនិត្យការស្រង់ចេញជាវិជ្ជមាន និងអវិជ្ជមាន នៅពេលអនុវត្តការទាញយកអាស៊ីត nucleic ។

វាត្រូវបានណែនាំថា ការណែនាំច្បាស់លាស់ត្រូវបានបង្ហោះនៅក្នុងតំបន់នីមួយៗ ដើម្បីអោយអ្នកប្រើប្រាស់យល់ដឹងអំពីច្បាប់នៃការប្រព្រឹត្ត។មន្ទីរពិសោធន៍រោគវិនិច្ឆ័យដែលរកឃើញកម្រិតទាបនៃ DNA ឬ RNA នៅក្នុងគំរូព្យាបាលប្រហែលជាចង់ទទួលយកវិធានការសុវត្ថិភាពបន្ថែមនៃការមានប្រព័ន្ធគ្រប់គ្រងខ្យល់ដាច់ដោយឡែកជាមួយនឹងសម្ពាធខ្យល់វិជ្ជមានបន្តិចនៅក្នុងបន្ទប់មុន PCR និងសម្ពាធខ្យល់អវិជ្ជមានបន្តិចនៅក្នុងបន្ទប់ក្រោយ PCR ។

ជាចុងក្រោយ ការបង្កើតផែនការធានាគុណភាព (QA) គឺមានប្រយោជន៍។ផែនការបែបនេះគួរតែរួមបញ្ចូលបញ្ជីនៃភាគហ៊ុនមេ និងស្តុកដែលធ្វើការ ច្បាប់សម្រាប់ការរក្សាទុកឧបករណ៍ និងសារធាតុ reagents ការរាយការណ៍ពីលទ្ធផលត្រួតពិនិត្យ កម្មវិធីបណ្តុះបណ្តាលបុគ្គលិក ក្បួនដោះស្រាយដោះស្រាយបញ្ហា និងសកម្មភាពដោះស្រាយនៅពេលចាំបាច់។

6. គន្ថនិទ្ទេស

Aslan A, Kinzelman J, Dreelin E, Anan'eva T, Lavander J. ជំពូកទី 3៖ ការបង្កើតមន្ទីរពិសោធន៍ qPCR ។ឯកសារណែនាំសម្រាប់ការសាកល្បងទឹកកំសាន្តដោយប្រើ USEPA qPCR method 1611. Lansing- Michigan State University.

សុខភាពសាធារណៈប្រទេសអង់គ្លេស, NHS ។ស្តង់ដារចក្រភពអង់គ្លេសសម្រាប់ការស៊ើបអង្កេតអតិសុខុមជីវវិទ្យា៖ ការអនុវត្តមន្ទីរពិសោធន៍ល្អនៅពេលអនុវត្តការវិភាគលើការពង្រីកម៉ូលេគុល) ។ការណែនាំអំពីគុណភាព។ឆ្នាំ 2013;4(4):1–15។

Mifflin T. ការបង្កើតមន្ទីរពិសោធន៍ PCR ។Cold Spring Harb Protoc។២០០៧; ៧.

Schroeder S 2013. ការថែទាំជាប្រចាំនៃ centrifuges: ការសម្អាត ការថែទាំ និងការសម្លាប់មេរោគនៃ centrifuges, rotors and adapters (White paper No. 14)។ទីក្រុង Hamburg: Eppendorf;ឆ្នាំ 2013 ។

Viana RV, Wallis CL ។ការអនុវត្តមន្ទីរពិសោធន៍គ្លីនិកល្អ (GCLP) សម្រាប់ការធ្វើតេស្តផ្អែកលើម៉ូលេគុលដែលប្រើក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍រោគវិនិច្ឆ័យ, នៅក្នុង: Akyar I, កម្មវិធីនិពន្ធ។វិសាលគមធំទូលាយនៃការត្រួតពិនិត្យគុណភាព។Rijeka, Croatia: Intech;ឆ្នាំ 2011: 29–52 ។


ពេលវេលាផ្សាយ៖ ថ្ងៃទី ១៦ ខែកក្កដា ឆ្នាំ ២០២០

ផ្ញើសាររបស់អ្នកមកយើង៖

សរសេរសាររបស់អ្នកនៅទីនេះ ហើយផ្ញើវាមកយើង
ទុកសាររបស់អ្នក។